在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,活率計(jì)數(shù)是評(píng)估細(xì)胞狀態(tài)的核心指標(biāo),臺(tái)盼藍(lán)染色與 AOPI 熒光染色作為主流方法,常讓研究者在選擇時(shí)陷入權(quán)衡。事實(shí)上,二者并無(wú)絕對(duì)優(yōu)劣,僅存在場(chǎng)景適配差異 ——博大博聚-全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,正是能精準(zhǔn)支撐兩種需求的全能工具。
臺(tái)盼藍(lán)染色作為沿用數(shù)十年的經(jīng)典方法,憑借操作便捷、成本可控的優(yōu)勢(shì),至今仍是基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室的常用染色方法。其原理是利用活細(xì)胞完整的細(xì)胞膜對(duì)染料的排斥作用:活細(xì)胞不被染色,死細(xì)胞因細(xì)胞膜破損被染成藍(lán)色,整個(gè)染色-計(jì)數(shù)流程可在幾分鐘內(nèi)完成。對(duì)于常規(guī)細(xì)胞傳代、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等對(duì)效率要求高的場(chǎng)景,這種“即染即測(cè)"的特性尤為實(shí)用。
但臺(tái)盼藍(lán)染色的局限性也需正視:
① 時(shí)效性嚴(yán)格:染色后需在10分鐘內(nèi)完成檢測(cè)。這是因?yàn)榛罴?xì)胞對(duì)臺(tái)盼藍(lán)的排斥是暫時(shí)的——長(zhǎng)時(shí)間暴露于染料中,臺(tái)盼藍(lán)的細(xì)胞毒性會(huì)逐漸破壞活細(xì)胞膜完整性,導(dǎo)致原本存活的細(xì)胞被染色,最終使活率檢測(cè)值偏低。在高通量實(shí)驗(yàn)中,若批量樣本處理間隔過(guò)長(zhǎng),極易出現(xiàn)前后數(shù)據(jù)偏差。
②-復(fù)雜樣本適應(yīng)性弱:對(duì)于直徑較小的細(xì)胞(如外周血單個(gè)核細(xì)胞,PBMC)或含大量雜質(zhì)的樣本,臺(tái)盼藍(lán)的明場(chǎng)檢測(cè)模式易受干擾。由于雜質(zhì)與細(xì)胞在形態(tài)、顏色上區(qū)分度低,顯微鏡下難以精準(zhǔn)識(shí)別,可能導(dǎo)致漏計(jì)(誤將小細(xì)胞當(dāng)作雜質(zhì))或錯(cuò)計(jì)(誤將雜質(zhì)當(dāng)作細(xì)胞)。
此時(shí),AOPI 熒光染色的優(yōu)勢(shì)便凸顯出來(lái)。AOPI熒光染色通過(guò)兩種核酸染料的協(xié)同作用實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)區(qū)分:吖啶橙(AO)可穿透所有細(xì)胞膜,與活細(xì)胞、死細(xì)胞的核酸結(jié)合,在488nm 激發(fā)光下發(fā)出綠色熒光;碘化丙啶(PI)同樣能與核酸結(jié)合,但僅能通過(guò)破損的細(xì)胞膜進(jìn)入死細(xì)胞,在535nm激發(fā)光下發(fā)出紅色熒光——最終呈現(xiàn) “活細(xì)胞綠、死細(xì)胞紅" 的清晰信號(hào)。
博大博聚-全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀搭載明場(chǎng)+雙色熒光通道:明場(chǎng)通道適配臺(tái)盼藍(lán)染色,雙色熒光通道:488nm 激發(fā) / 525nm 發(fā)射通道捕捉 AO 綠色信號(hào),535nm 激發(fā) / 610nm 發(fā)射通道識(shí)別 PI 紅色信號(hào),即使是早期凋亡(細(xì)胞膜輕微破損)的細(xì)胞也能被精準(zhǔn)判定。更重要的是,熒光信號(hào)的特異性讓 AOPI 對(duì)復(fù)雜樣本的耐受性遠(yuǎn)超臺(tái)盼藍(lán):處理含大量細(xì)胞碎片、血清顆粒的樣本時(shí),雜質(zhì)不會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào),不干擾計(jì)數(shù);
當(dāng)然,AOPI 熒光染色也有需注意的短板:
① 成本較高:AOPI熒光染料成本顯著高于臺(tái)盼藍(lán)染料;
② 操作要求更嚴(yán):熒光染料易受強(qiáng)光淬滅,需避光操作(染色后、檢測(cè)前需避免直射光),否則可能因信號(hào)衰減導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏差。
因此,在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)、學(xué)生訓(xùn)練等對(duì)成本敏感且樣本簡(jiǎn)單的場(chǎng)景,臺(tái)盼藍(lán)仍是性價(jià)比之選;而在生物制藥(如 CAR-T 細(xì)胞制備)、復(fù)雜樣本分析(如 PBMC 活性檢測(cè))等對(duì)精度要求嚴(yán)苛的場(chǎng)景,AOPI 顯然更具優(yōu)勢(shì)。
博大博聚-全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀通過(guò)模塊化設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn) “一鍵切換":臺(tái)盼藍(lán)染色模式支持高通量快速計(jì)數(shù),AOPI熒光染色模式搭載 AI 智能算法(可自動(dòng)識(shí)別細(xì)胞與雜質(zhì)、拆分聚團(tuán)細(xì)胞),兼顧效率與精度。無(wú)論你是高校實(shí)驗(yàn)室的教學(xué)研究者,還是生物制藥企業(yè)的GMP級(jí)質(zhì)控人員,都能找到適配方案。
選擇哪種染色?答案藏在你的實(shí)驗(yàn)需求里。而博大博聚-全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,始終是那個(gè)懂你所需的可靠伙伴,讓每一次活率計(jì)數(shù)都精準(zhǔn)高效。
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